КУРСЫ ВАЛЮТ
USD 0.00 0.00
EUR 0.00 0.00
GBP 0.00 0.00









Жизнеспособность клеток | Print |  E-mail

Cell Viability

Перейти на сайт производителя...

  • Набор для количественного анализа клеток. Перейти...

Количественный анализ клеток широко используется в клеточной биологии для изучения факторов роста, цитокинов, компонентов сред, скрининга цитотоксических веществ и активации лимфоцитов.

Необходимость в достоверном, точном анализе, который позволит обрабатывать большое количество образцов, привела к появлению таких методов как использование радиоактивного тимидина и бромдезонсиуридина (Brdu - 5-bromodeoxyuridine) для метки ДНК в  живых клетках. Недостатки этих методов заключаются в применении радиоактивных материалов и относительно сложной технологии.

Анализ использования солей тетразолия, такой как MTT, основывается на преобразовании живыми клетками данных солей в нерастворимые окрашенные формазановые соединения. Биохимический процесс базируется на активности митохондриальных энзимов, которые быстро инактивируются после гибели клетки. Этот метод признан очень действенным для оценки жизнеспособности клеток.

Колориметрический количественный анализ клеток, такой как XTT (впервые был описан Скудиеро П. в 1988 году), значительно упрощает процедуру количественной оценки  вследствии продуцирования растворимых красящих веществ без использования радиоактивных материалов.

Этот метод имеет ряд преимуществ:

  • прост в использовании, т.к. не требует использования дополнительных реагентов и/или промывки клеток;
  • высокая скорость обработки: используется микропланшеты и считывающее устройство (ELISA-reader);
  • дискретность анализа даже при малых клеточных концентрациях;
  • безопасность, т.к. не используюися радиоактивные изотопы.

Компоненты набора XTT:

  1. стерильный раствор (10х5 мл), содержащий реагент XTT. Раствор должен хранится в замороженном состоянии и быть защищен от попадания световых лучей. При появлении осадка, рекомендовано нагреть раствор до 37ºС, затем осторожно его встряхивать до исчезновения осадка;
  2. активирующий реагент (2х0,5 мл) - стерильный раствор, содержащий PMS (N-methyl dibenzopyrazine methyl sulfate). Раствор должен хранится в замороженном состоянии и быть защищен от попадания световых лучей. При появлении осадка, рекомендовано нагреть раствор до 37ºС, затем осторожно его встряхивать до исчезновения осадка.

Принцип количественного анализа ХТТ основан на способности метаболически активных клеток преобразовывать соли тетразолия в окрашенные в оранжевый цвет соединения формазана. Краситель водорастворим и  его интенсивность считывается при определенной длине волн в спектрофотометре. Значение интесивности красителя пропорциональна количеству метаболически активных клеток. Метод тестирования включает культивирование клеток в 96-луночных планшетах с добавлением ХТТ и инкубирование в течение 2-24 часов, когда происходит окрашивание.Затем происходит сам процесс считывания в спектрофотометре с использованием ELISA-ридера. Чем больше активных клеток в лунках, тем больше активность митохондриальных энзимов, и  тем выше концентрация красителя, который и может быть количественно оценен данным методом.

 

 

2010-09-07

 

 

 

Корзина

VirtueMart
Ваша корзина пуста.

Тел. (495) 651-6085